乳酸菌饮料中的大肠杆菌怎么检测?检测方法有哪些?-凯发真人首先娱乐
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。那乳酸菌饮料中的大肠杆菌怎么检测?检测方法有哪些呢?
乳酸菌饮料中的大肠杆菌怎么检测?
(一)检验方法
1.乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品,采取量及稀释倍数,依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在l m j以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,lm1及1mi以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±l℃温箱内,培养24±2小时,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性;如有产气者,则按下列程序进行。
2.分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±l℃温箱内,培养18~24小时,然后取出,观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。
3.证实试验。在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落l~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃ 温箱内培养24±2小时,观察产气情况。凡乳糖管产气,革
兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
4.报告。根据证实为大肠菌群阳性的管数,查mpn检索表,报告每l 00ml(g)大肠菌群的最可能数。
(二)培养基
①乳糖胆盐发酵培基
成分:蛋白胨:20g、猪胆盐(或牛,羊胆盐):5g、乳糖:10g、0.04%溴甲酚紫水溶液: 25m1、蒸馏水: 1 000m1
制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正ph,加入指示剂,分装每管l 0ml,并放入一个小倒管,高压灭菌115℃15分钟。
附注:双料乳糖胆盐发酵培基除蒸馏水外,其他成分加倍。
用途:乳糖发酵试验用。
原理:细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用,细菌产生的分解糖类的酶,随细菌种类不同而异,可以此来鉴别细菌。
乳糖是双糖,细菌分解双糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖,葡萄糖可直接被细菌利用,而半乳糖则需在细胞内转化为葡萄糖后再被利用。
糖发酵试验主要是测定细菌分解糖类以后所产生的酸,以培基ph降低(指示剂变色)作为观察结果的指标。
大肠杆菌等细菌在酸性环境中,由于甲酸脱氢酶的作用,可使甲酸分解成co2和h2,在培基中产生大量气体,进入倒管中,以便观察。
注:常用于供发酵试验的各种糖类、醇类和糖苷类(见表3-1)
②伊红美蓝琼脂培基
成分:蛋白胨 10g、乳糖 10g、磷酸氢二钾 2g、琼脂 17g、2%伊红y溶液 20ml、0.65%美蓝溶液 10ml、蒸馏水 1000ml、ph7.1
制法:将蛋l白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正ph,分装于烧瓶内,高压灭菌121℃15分钟备用。临用时加入乳糖,并加热溶化琼脂,冷至50一55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
原理:大肠菌群细菌发酵乳糖产酸,使伊红与美蓝结合而成黑色化合物,故菌落呈黑紫色,有时还可产生金属光泽。黑色程度与光泽产生情况与伊红、美蓝二者比倒有关。不发酵乳糖的细菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)则为无色菌落。
③乳糖发酵培基
成分:蛋白胨 20g、乳糖 10g、o.04%溴甲酚紫水溶液 25ml、蒸馏水 1000ml、ph7.4
制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正ph,加入指示剂,按检验要求分装30ml、10ml或3ml,并放入一个小倒管,高压灭菌115℃15分钟。
附注: (1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。(2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用.3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
4.蛋白胨水
成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g、氯化钠 5g、蒸馏水 1 000ml ph7.4