如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量?-凯发真人首先娱乐

2022-12-12
发布:国科检测

我们平时喝的酸奶、乳酸菌饮料都含有个关键成分——乳酸菌。能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的有益菌,广泛存在于人体的肠道中,大部分是具有改善肠道消化功能的作用。那你知道如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量吗?

如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量?

如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量?

一、样本采集

检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂,样本应放入冰箱保存,心快检验。

二、检验方法(中华人民共和国国家标准  乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验gb/t 16347-1996)

乳酸菌菌总数的测定:乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后,所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。

(一)检验程序

乳酸菌菌落总数检验程序如下:

(二)培养基和试剂

改良tja培养基(改良番茄汁琼脂培养基);改良mc培养基(modified chalmers培养基);0.1%亚甲蓝牛乳培养基;6.5%氯化钠肉汤参照;ph9.6葡萄糖肉汤;40%胆汁肉汤;淀粉水解培养基;精氨酸水解培养基;乳酸杆菌糖发酵管;七叶苷培养基;革兰氏染色液;3%过氧化氢溶液;蛋白胨水、靛基质试剂;明胶培养基;硝酸盐培养基、硝酸盐试剂;生理盐水:定量分装于三角瓶和试管内灭菌。

(三)操作步骤

1.以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml(或25g)放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1:10的均匀稀释液。

2.用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1m,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。

3.另取1ml灭菌吸管,按上述操作顺序,作10倍增稀释液,如此每递增一次,即换用1支1ml灭菌吸管。

4.选择2~3个以上适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。

5.稀释液移入平皿后,应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基(改良tja或改良mc)注入平皿约15ml,并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1ml稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照,以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。

 6.待琼脂凝固后,翻转平板,置36℃±1℃温箱内培养72h±3h取出,观察乳酸菌菌特征,选取菌落数在30~300之间的平板进行计数。计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧氢酶试验。革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出皿内的乳酸菌数,然后乘其稀释倍数即得每亳升样品中乳酸菌数。例如,检样10-4的稀释液在改良tja琼脂平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实的乳酸菌的4个,则1ml检样中乳酸菌数为:

35×4/5×104=2.8×105

7.乳酸菌在改良tja和改良mc培养基上菌落生长形态特征。

(四)乳酸菌的鉴定

对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时,则作以下试验。

1.菌种制备  自平板上挑取菌落,接种于改良tja或改良mc琼脂斜面,于36℃±1℃,24~48h培养,刮取菌苔,分别进行下列试验。

2.乳酸杆菌鉴定试验  极少见还原硝酸盐,不液化明胶,不产生靛基质和硫化氢。

3.常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应。

4.产酸乳的链球菌的鉴别试验。



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